谷氨酸棒杆菌YILW苏氨酸脱水酶基因的克隆表达及酶学性质

• 作者: 史建明 徐兰兰 徐庆阳 谢希贤 陈宁
• 来源期刊: 生物加工过程
• 学科: 生物学
• 关键词: 谷氨酸棒杆菌 酶学性质 表达 苏氨酸脱水酶
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 页码范围: 55-60
• 分类号: Q812|Q78
• 字数: 4196字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-3678.2011.01.012

摘要

将L-异亮氨酸生产菌谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum YILW) 苏氨酸脱水酶(threonine dehydratase,TD)的编码基因ilvA在大肠杆菌中进行异源表达及进行初步的酶学性质研究.分别以C.glutamicum ATCC13032、YILW的基因组DNA为模板,利用PCR技术扩增出苏氨酸脱水酶的编码基因ilvA,测序获得编码序列.利用质粒PET-His将该基因在大肠杆菌BL21(DE3)中进行重组表达、金属螯合纯化,对其酶学性质进行初步研究.结果显示C. glutamicum YILW编码基因序列与已报道的ilvA序列相差5个碱基,相似度为99.6%,第383位氨基酸由苯丙氨酸突变为缬氨酸.酶学性质研究表明:重组酶YilwTD最适反应温度为32 ℃,在20~55 ℃范围内该酶较稳定,最适pH为6.7,该酶底物专一性强,对最适底物苏氨酸的米氏常数Km=8.32 mmol/L, 最大反应速度Vmax= 3.18×104 U/mg,与野生型酶相比,突变(F383V)后可显著降低终产物对酶的反馈抑制作用.为揭示突变对苏氨酸脱水酶活性的影响及进一步利用基因工程技术改造L-异亮氨酸生产菌,提高L-异亮氨酸产量奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	谢希贤		10	88	7.0	9.0
2	徐庆阳		8	73	6.0	8.0
3	陈宁		10	88	7.0	9.0
4	史建明		2	7	2.0	2.0
5	徐兰兰		1	3	1.0	1.0