猪内源性反转录病毒囊膜基因env真核表达质粒的构建及鉴定

• 作者: 叶小丽 吕茂民 吴健敏 田克恭 章金刚 郭逸 颜奇坡 马玉媛
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 猪内源性反转录病毒 env基因 真核表达
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 683-686
• 分类号: Q78
• 字数: 3139字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2011.05.019

摘要

目的:构建猪内源性反转录病毒(PERV)囊膜基因env的真核表达质粒pHCMV-env并加以鉴定,为研究PERV的细胞嗜性和宿主范围奠定基础.方法:用RT-PCR方法扩增五指山猪来源PERV的env基因,将其插入pGEM-T easy载体中,构建重组质粒pGEM-T-env,酶切鉴定正确后,将pGEM-T-env与pHCMV-VSV-G表达质粒同时经EcoR Ⅰ酶切消化后连接,构建重组表达质粒pHCMV-env,并进行酶切、测序鉴定；将鉴定正确的质粒pHCMV-env转染HEK293T细胞,采用PCR、RT-PCR检测转染后env基因的整合和转录情况.结果:扩增得到五指山猪来源PERV的env基因,并构建了pHCMV-env真核表达质粒,转染HEK293T细胞系后,该细胞系中有目的基因的整合和转录.结论:构建了真核表达质粒pHCMV-env,并且在HEK293T细胞中能够整合并转录,为研究PERV的细胞嗜性和宿主范围奠定了基础.