梅花鹿鹿茸S100A4融合蛋白在大肠杆菌中的表达纯化

• 作者: 刘东 李春义 王大涛 褚文辉 赵海平 邢秀梅 鲁晓萍
• 来源期刊: 特产研究
• 学科: 生物学
• 关键词: S100A4 PGEX-6P-1 BL21(DE3) pLys S 蛋白表达
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 7-10
• 分类号: Q786
• 字数: 2623字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-4721.2011.02.002

摘要

我们的前期研究表明,鹿茸发生和再生都是依赖干细胞的过程.鹿茸的干细胞存在于鹿未来鹿茸发生区的骨膜中,即生茸骨膜.AP细胞表达特有的分子S100A4,推测为鹿茸发生的关键调节分子.进一步从分子水平阐述S100A4在鹿茸发生中的调节机制需要高质量S100A4的纯品.为了解决这一问题,我们针对已从梅花鹿AP细胞反转录出的S100A4基因序列,设计了含有EcoR I和BamH I酶切位点的上下游引物,并扩增出了目的片段.其后将S100A4基因片段和PGEX-6P-1载体酶切并进行了连接,转入Top10F'感受态细胞中,涂板筛选出了阳性克隆,进行了菌液PCR及双酶切鉴定,再将重组质粒转入了BL21(DE3)pLys S表达菌株进行了IPTG诱导表达.用聚丙烯酰胺凝胶电泳及western blot鉴定表明融合蛋白成功表达,随后对融合蛋白进行了纯化.本研究成功地实现了鹿本身特有的S100A4基因的体外表达.