单条线虫DNA提取方法

• 作者: 张建成 王江岭 顾建锋
• 来源期刊: 植物检疫
• 学科: 农学
• 关键词: 线虫 DNA提取 方法优化 蛋白酶K 温度
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 32-35
• 分类号: S763
• 语种: 中文

摘要

大量线虫DNA的提取可能因线虫不纯而受到污染,溶液多次转移造成DNA损失,并且在提取过程中加入过多的溶质离子也可能对PCR扩增有干扰,从而影响下一步的研究.本研究用液氮快速冷冻单条线虫,继以85℃快速变温,用温度的剧烈变化使线虫裂解,再以蛋白酶K降解蛋白质,提高了获得的DNA的纯度和数量.通过多种线虫的验证试验表明,该方法高效、快速、稳定.该试验方法有如下优点:(1)使用Taq酶附带的PCR Buffer代替WLB裂解液和SDS裂解液,减少了配置的不确定性和外来离子的影响.(2)整个提取过程在一个PCR管中完成,并可直接用于PCR扩增,没有溶液的转移和过多的溶质添加,减少污染和对后续PCR的影响.(3)使用变温处理代替其他手工破碎方法,减少了外界污染物的掺入,不需要手工操作技巧.与另外2种提取线虫DNA的蛋白酶K方法相比,本研究提取单条线虫DNA的时间短,效率高,PCR扩增结果稳定可靠,符合快速检测的需求;此外,本研究所使用的方法降解单条线虫蛋白质彻底,提取DNA数量多,稀释32倍仍能扩增出明显的条带,可进行多次分子试验研究.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	顾建锋	宁波出入境检验检疫局技术中心	82	365	8.0	15.0
2	王江岭	宁波出入境检验检疫局技术中心	22	167	7.0	12.0
3	张建成		4	71	1.0	4.0