玉米矮花叶病毒CP基因dsRNA的原核表达与分离

• 作者: 张姣 朱苏文 甘德芳 程备久 赵阳
• 来源期刊: 激光生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 玉米矮花叶病毒(Maize Dwarf Mosaic Virus,MDMV) CP基因 原核表达 dsRNA
• 年，卷（期）: 2011,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 360-366
• 分类号: Q7
• 字数: 5091字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-7146.2011.03.016

摘要

根据玉米矮花叶病毒CP基因序列设计特异性引物,RT-PCR扩增玉米矮花叶病毒CP基因特异性干涉片段,将干涉片段及pUCCRNAi载体分别用BamH I及Sal I双酶切,然后将干涉片段分别正反向插入pUC- CRNAi载体中,构建CP基因反向重复克隆载体pUCCRNAi+2 F.再利用Pst I-Sal I位点插入到L4440质粒中构建原核表达载体LMCP.利用IPTG进行诱导表达并对诱导表达条件进行优化.结果表明,经过IPTG诱导,LMCP在大肠杆菌HT115(DE3)菌株中可表达产生预期大小的核酸片段,经DNase I和RNase A消化处理,证实为dsRNA.同时IPTG浓度为0.4～0.6 mmol/L,诱导表达4 h,dsRNA的表达量最高.另外,溶解于ddH2O中的dsRNA稳定性要高于溶解在NaCl中的,且随着放置时间的延长,dsRNA将出现明显的降解.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱苏文	安徽农业大学生命科学学院	89	736	15.0	22.0
2	程备久	安徽农业大学生命科学学院	111	852	16.0	23.0
3	甘德芳	安徽农业大学园艺学院	23	103	6.0	9.0
4	赵阳	安徽农业大学生命科学学院	18	164	7.0	12.0
5	张姣	安徽农业大学园艺学院	2	3	1.0	1.0