川芎嗪-黄芪甲苷降低缺血/再灌注损伤的大鼠脑组织中IL-1β和Caspase-3基因的表达:实时定量PCR的研究

• 作者: 万海同 朱振洪 李金辉
• 来源期刊: 生理学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 实时PCR IL-1β Caspase-3 基因 缺血再灌注损伤
• 年，卷（期）: 2011,（3）
• 所属期刊栏目: 实验技术
• 页码范围: 272-280
• 页数: 9页
• 分类号: Q7
• 语种: 中文

摘要

本文旨在运用实时荧光PCR技术建立大鼠脑缺血/再灌注(ischemia-reperfusion,I/R)中IL-1β和Caspase-3基因绝对定量分析方法.成年雄性Sprague-Dawely大鼠被随机分成了5组:假手术组、I/R模型组、黄芪甲苷组、川芎嗪-黄芪甲苷组、尼莫地平组.除假手术组外,其余各组均进行脑I/R处理,然后通过腹膜内注射进行药物处理,时间为脑I/R后0 h、12 h、1 d、2 d直至7 d.假手术组和I/R模型组注射生理盐水(5 mL/kg),黄芪甲苷组中黄芪甲苷剂量为20 mg/kg,川芎嗪-黄芪甲苷组中川芎嗪和黄芪甲苷剂量分别为10 mg/kg和20 mg/kg,而尼莫地平组中尼莫地平剂量为10 mg/kg.通过常规RT-PCR克隆了大鼠的IL-1β和Caspase-3基因,运用TA克隆技术分别构建了重组质粒pTA2-IL1和pTA2-Casp3,重组质粒经过紫外分光光度计测定A260/A280比值,并计算拷贝数.以该质粒作为标准品,首先对实时荧光PCR反应的引物进行筛选和验证,然后进行反应退火温度的优化,最后定量检测各组损伤的脑组织中IL-1β和Caspase-3的基因表达情况.结果显示,从候选引物中各筛选到一对最佳引物,熔解度曲线分析显示单一峰,琼脂糖电泳表明反应产物与预计目标产物大小一致.梯度退火温度实验表明IL-1β和Caspase-3基因的最佳退火温度分别是59°C和61.2°C.实时荧光PCR检测结果表明,与假手术组相比,I/R模型组中的IL-1β和Caspase-3表达显著升高;和I/R模型组相比,黄芪甲苷组、川芎嗪-黄芪甲苷组、尼莫地平组中IL-1β和Caspase-3基因表达水平均有所下降,特别是川芎嗪-黄芪甲苷组基因下调最显著.以上这些结果提示,本研究建立的方法适用于中药处理I/R模型后IL-1β和Caspase-3基因的定量分析.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	万海同		257	1519	20.0	26.0
2	朱振洪		49	168	7.0	11.0
3	李金辉		19	170	7.0	13.0