用P. pastoris的pAOX1表达系统表达木糖异构酶

• 作者: 尹慧祥 张爱联 易国辉
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 木糖异构酶 P.pastoris pAOX1
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 页码范围: 17-19
• 分类号: Q786
• 字数: 1949字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-311X.2011.01.006

摘要

目的:应用P. pastoris的pAOX1表达系统分泌表达重组木糖异构酶.方法:用PCR法从大肠杆菌基因组中扩增木糖异构酶基因(xi).用EcoRⅠ和NotⅠ双酶切将其基因克隆进P. pastoris表达载体.通过电转法将其木糖异构酶基因重组于P. pastoris基因组,筛选G418抗性700μg/ml的重组子作为工程菌GS115(pPIC9K-xi).在摇瓶中发酵用甲醇诱导表达重组木糖异构酶.用SDS-PAGE分析重组蛋白的表达情况,用糖酵解法对表达产物进行活性分析.结果:木糖异构酶基因在pAOX1的调控下,在P. pastoris中经甲醇诱导能分泌表达,摇瓶发酵2d表达量为35mg/L,表达产物具有代谢木糖的作用.结论:成功地克隆了大肠杆菌的木糖异构酶基因,并实现用pAOX1系统在P. pastoris中表达中木糖异构酶,为用P. pastoris规模化生产重组木糖异构酶奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	易国辉		24	37	4.0	5.0
2	尹慧祥		1	0	0.0	0.0
3	张爱联		1	0	0.0	0.0