马铃薯块茎糖基转移酶基因的克隆及其RNAi载体的构建

• 作者: 司怀军 张俊莲 张金文 王旺田 王蒂 陶士珩
• 来源期刊: 作物学报
• 关键词: 马铃薯 鼠李糖基转移酶 基因克隆 序列分析 RNAi载体
• 年，卷（期）: 2011,（11）
• 所属期刊栏目: 作物遗传育种种质资源分子遗传学
• 页码范围: 1926-1934
• 分类号: S435.32
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1006.2011.01926

摘要

为探讨鼠李糖基转移酶(rhamnosyltransferase,sgt3)基因与类固醇糖苷生物碱(steroidal glycoalkaloid,SGAs)合成关系,揭示sgt3基因在SGAs合成中的作用,本研究根据GenBank No:DQ266437保守区设计特异引物,通过RT-PCR技术获得马铃薯块茎sgt3相似基因；采用生物信息学相关软件分析,预测sgt3相似基因cDNA序列编码的蛋白质结构和功能,构建基于sgt3基因的植物干扰表达载体.结果表明,克隆的sgt3相似基因与报道的sgt3基因序列相似性达到99.54％,其ORF长为1 500 bp,编码505个氨基酸残基,具有UDPG糖基转移酶保守结构域及许多重要功能位点；三级结构预测表明,该氨基酸同糖基转移酶单体结构模型相似,为糖基转移酶家族成员,表明可能具有合成类固醇糖苷生物碱功能,基因序列已注册到GenBank,序列登录号为HM188447.以此为靶序列,构建由Actin启动子和CIPP启动子驱动的与sgtl和sgt2基因相似度高的含有sgt3基因序列的干扰表达载体,将为糖苷生物碱的合成、代谢的进一步研究及低糖苷生物碱转基因马铃薯品种的培育奠定基础.