利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统在家蚕中表达人瘦素蛋白

• 作者: 付凡 唐顺明 汪生鹏 沈兴家 赵巧玲 陈蔚 黄金山
• 来源期刊: 蚕业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 人瘦素蛋白 Bac-to-Bac杆状病毒表达系统 重组杆状病毒 融合蛋白 家蚕
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 325-329
• 分类号: S881.2|Q78
• 字数: 4859字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0257-4799.2011.02.023

摘要

瘦素(leptin)蛋白由肥胖基因编码,对人体能量代谢等多种生理过程起着重要的调节作用.利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统,将人瘦素蛋白基因(lep)克隆到杆状病毒转移栽体pFastBacHTb,并转化E.coli DH10Bac,获得重组杆粒Bacmidlep,然后转染家蚕BmN细胞,获得重组杆状病毒.用SDS-PAGE和Western blotting方法在感染重组病毒的家蚕BmN细胞检测到大小约22kD的蛋白条带,与预期的人瘦素蛋白分子质量相符.给家蚕5龄起蚕注射重组病毒液后的4～5 d出现发病症状,RT-PCR检测发病家蚕的血液中有lep基因转录,并通过SDS-PAGE和Western blotting检测到大小为22kD的人瘦素蛋白的表达.研究结果表明,利用Bac-to-Bac表达系统能够获得含有人瘦素蛋白基因的重组杆状病毒,并且目的蛋白能在家蚕细胞及幼虫体内表达.