茶卷叶蛾寄生真菌球孢白僵菌几丁质酶基因的克隆与序列分析

• 作者: 刘丰静 吴光远 曾明森 王定锋 王庆森
• 来源期刊: 福建农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 球孢白僵菌 茶卷叶蛾 几丁质酶基因 克隆 序列分析
• 年，卷（期）: 2011,（4）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 507-512
• 分类号: S435
• 字数: 4079字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-0384.2011.04.001

摘要

球孢白僵菌是最重要的虫生真菌之一,在农林害虫生防中发挥着重要的作用.本研究从茶卷叶蛾球孢白僵菌JYBb201-11菌株中克隆了几丁质酶Bbchit1基因(GenBank登录号:HQ435871).根据GenBank上昆虫病原真菌几丁质酶基因序列同源性设计引物,分别进行DNA-PCR和总RNA-RT-PCR反应,对得到的目的片段,回收纯化后通过PMD18-T载体转化到大肠杆菌DH5α中,获得几丁质酶基因序列的重组质粒PMD18-chit,并测序.结果表明,DNA-PCR和总RNA-RT-PCR获得的基因序列完全一样,都是一个完整ORF序列,含1 047 bp核酸序列,编码348个氨基酸,信号肽长度为22个氨基酸,成熟蛋白理论分子量约为36.78 kD,理论等电点为5.95.该蛋白序列中包含2个保守区域,即底物结合区域( SIGG)和几丁质的活性位点(DGIDIDIE),该蛋白可归为几丁质酶18族V类.氨基酸序列同源性分析表明,球孢白僵菌JYBb201-11菌株几丁质酶与球孢白僵菌Bb0062菌株(AAN41259)和NCIM1216菌株(ACF32998)几丁质酶chit1氮基酸序列同源性都达99.43％;与球孢白僵菌MTCC 2028菌株(ACZ28129)几丁质酶chit1氨基酸序列同源性达98.28％.