雷蒙德氏棉叶绿体基因组 Fosmid 文库构建

• 作者: 华金平 张曦 李召虎 李朋波 王彦霞 薛龙飞
• 来源期刊: 棉花学报
• 学科: 农学
• 关键词: 雷蒙德氏棉 叶绿体DNA Fosmid文库
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 页码范围: 10-14
• 分类号: Q812|S562
• 字数: 3125字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-7807.2011.01.002

摘要

采用高盐、低pH值法提取雷蒙德氏棉叶绿体DNA;通过物理剪切法获得随机断裂的DNA片段:剪切片段末端、补平修饰后与pCCIFOS载体连接;用噬菌体包装蛋白包装重组DNA.侵染大肠杆菌EPI300,构建了雷蒙德氏棉叶绿体基因组文库.对于叶绿体DNA剪切,以1 mL注射器中等速度吸打18次为最佳参数.叶绿体基因组Fosmid文库滴度为1×104cfu·mL-1,插入片段大小平均为38 kb,最终筛选出39个克隆用于后续研究,覆盖叶绿体基因组9.2倍.以叶绿体特异标记筛选出能够覆盖雷蒙德氏棉叶绿体全基因组的6个克隆:F66,F46,F28,F8,F55和F3,为基因组结构和功能基因分析提供了良好的基础.