分选酶A在pET32a(+)原核表达载体中的表达和鉴定

• 作者: 朱芳 罗立新 邓思
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 生物学
• 关键词: 金黄色葡萄球菌 pET32a-SrtA△N24 pET32a-SrtA△N59 大肠杆菌 原核表达
• 年，卷（期）: 2011,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 218-222
• 分类号: Q78
• 字数: 4397字
• 语种: 中文

摘要

旨在pET32a(+)原核表达载体中表达金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)中的转肽酶分选酶(SrtA)并进行鉴定.以含有pET22-srtA质粒为模板,设计并合成引物,PCR扩增得到SrtA△N24和SrtA△N59基因,经过BamH Ⅰ、Xho Ⅰ酶切,克隆入表达载体pET32a(+)中,构建重组载体pET32a-SrtA△N24及pET32a-SrtA△N59,并转化入大肠杆菌BL21(DE3).经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达后用SDS-PAGE和Western blotting对表达产物分别进行分析和鉴定.然后对重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达条件进行了优化.结果显示重组载体pET32a-SrtA△N24和pET32a-SrtA△N59分别表达出相对分子量为约42 kD和37 kD的融合蛋白,经SDS-PAGE和Westem blotting检测显示其分子量与预期的大小相符合.成功构建了重组质粒pET32a-SrtA△N24和pET32a-SrtA△N59,并且在大肠杆菌BL21(DE3)中获得了高效融合表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	罗立新	华南理工大学生物科学与工程学院	75	847	17.0	25.0
2	邓思	华南理工大学生物科学与工程学院	2	11	2.0	2.0
3	朱芳	华南理工大学生物科学与工程学院	1	9	1.0	1.0