用于分子影像学研究的双融合报告基因表达载体的构建及功能验证

• 作者: 单鸿 周斌 孟晓春 张波 朱康顺 李丹 覃杰 黄明声
• 来源期刊: 中华医学杂志
• 关键词: 磁共振成像 基因,报告 重组融合蛋白质类
• 年，卷（期）: 2011,（47）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 3363-3366
• 页数: 4页
• 字数: 2912字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0376-2491.2011.47.013

摘要

目的 构建增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和人转铁蛋白受体(TfR)双融合报告基因表达载体,并进行功能鉴定,为活体光学/磁共振双模式成像提供实验基础.方法 将TfR基因克隆到pEGFP-C1载体,构建重组pEGFP-C1 -TfR质粒.pEGFP-C1 -TfR质粒转染293T细胞48 h后,通过荧光显微镜观察EGFP的表达情况；通过RT-PCR检测TfR的表达情况；通过激光共聚焦扫描显微镜检测EGFP-TfR融合蛋白的亚细胞定位；通过Tf探针摄取和竞争实验检测EGFP-TfR融合蛋白的功能.结果 测序结果显示,EGFP-TfR基因序列正确,无突变或缺失.重组质粒转染293T细胞后,荧光显微镜下观察到EGFP的表达；RT-PCR结果显示TfR高效表达；EGFP-TfR融合蛋白主要位于细胞膜,并能够特异介导Tf的内吞.结论 EGFP-TfR双融合报告基因表达载体构建成功,并且能够高效表达发挥各自的功能,可以用于后续的活体光学/磁共振双模式成像.