适体SELEX筛选中单链DNA的制备

• 作者: 刘贤进 屠康 王丽 王耘 贺江 雷兆静
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 适体 SELEX 双链DNA 单链DNA
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 所属期刊栏目: 加工贮藏·质量安全
• 页码范围: 1133-1136
• 分类号: Q524
• 字数: 3346字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2011.05.039

摘要

探讨建立适体SELEX筛选中单链DNA(ssDNA)的制备方法,生成适体筛选的次级库,为适体SELEX筛选奠定基础.将PCR扩增后带生物素标记的双链DNA(dsDNA)连接在链霉亲和素标记的凝胶上,用NaOH变性解链制备ssDNA.利用荧光法分析dsDNA与凝胶结合所需的时间及NaOH对生物素与链霉亲和素标记凝胶结合的影响,在优化的试验条件下制备ssDNA,用琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳对其产物进行鉴定.结果显示:生物素标记的dsDNA与链霉亲和素标记的凝胶结合的时间以40 min为佳,0.01 mol/L、0.10 mol/L和1.00 mol/L的NaOH均不影响生物素与链霉亲和素标记凝胶的结合;在优化试验条件下制备的产物为ssDNA.表明采用上述方法制备ssDNA,操作简单、方便,所需时间短,适用于适体SELEX筛选中次级库的生成.