胚柄特异性表达顺式元件结合蛋白酵母单杂交文库的构建

• 作者: 夏晗 宋国琦 王兴军 赵传志
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 胚柄特异基因 顺式元件 酵母单杂交
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 所属期刊栏目: 研究资源
• 页码范围: 953-959
• 分类号: S184
• 字数: 6388字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2011.05.023

摘要

旨在构建酵母单杂交文库用于筛选与胚柄特异基因G564启动子顺式元件结合的转录因子.本研究根据植物胚柄特异表达基因G564启动子关键序列(GAAAAGCGAA)合成了5次串联重复序列,并与报告质粒pHIS2.1连接构建诱饵载体pHIS2.1-G564-5A；以纯化的拟南芥(Arabidopsis thaliana)幼嫩种子mRNA为模板,合成SMARTTMⅢ和CDSⅢ锚定末端ds cDNA;并将ds cDNA与线性化融合表达载体pGADT7-Rec2以及诱饵载体pHIS2.1-G564-5A共转化到酵母Y187,构建酵母单杂交文库.文库的共转化效率为5.53×105cfu/μg.对文库中的阳性克隆进行测序,获得117条可读序列.对其进行基因功能注释并进一步分析基因的功能发现,具有DNA结合功能的蛋白14个,具有蛋白质结合功能的蛋白8个.上述22个蛋白包括TATA结合蛋白1 (TBP1),支架结构相关区(SAR)DNA-结合蛋白,胚珠发育蛋白,G- box结合因子1(GBF1),组蛋白H3等.本研究为分离和克隆胚柄中特异表达的转录因子提供了候选基因.