嗜酸热脂环酸杆菌中甘露聚糖酶活性位点的确立

• 作者: 何广正 张彩凤 徐书景 薛张伟 赵宝华 鞠建松
• 来源期刊: 微生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 甘露聚糖酶 定点突变 活性位点
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 页码范围: 66-74
• 分类号: Q814
• 语种: 中文

摘要

[目的]通过定点突变确定嗜酸热脂环酸杆菌中甘露聚糖酶的活性催化位定.[方法]根据序列比对和GH53家族的结构信息选择可能的催化活性位点,利用重叠PCR法构建定点突变体,采用薄层层析(TLC)法和3,5-二硝基水杨酸(DNS)法检测各酶蛋白活性.[结果]通过重叠PCR法成功构建了7个位点的突变体,其中第150和159位的氨基酸突变对活性改变甚少或几乎没有,而第151和231位谷氨酸的羧基基团的改变以及双位点突变体E2Q则导致其对各种底物催化活性的丧失,说明位于β4和β7折叠的C末端的E151和E231的羧基基团作为功能基团参与了催化反应.[结论]E151和E231分别是新型甘露聚糖酶AaManA的酸碱催化位点和亲核催化位点.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵宝华	河北师范大学生命科学学院	238	1801	20.0	28.0
2	薛张伟	河北师范大学生命科学学院	4	14	3.0	3.0
3	徐书景	河北师范大学旅游学院	22	63	5.0	6.0
4	鞠建松	河北师范大学生命科学学院	25	67	5.0	6.0
5	何广正	河北师范大学生命科学学院	9	17	3.0	4.0
6	张彩凤	河北师范大学生命科学学院	4	25	3.0	4.0