RNAi沉默Gli1基因对人胶质瘤细胞U251增殖与凋亡的影响

• 作者: 李卉 李惠武 柳琛 段明军 田海龙 白靖平
• 来源期刊: 中华神经医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: Hedgehog通路 信号转导 RNA干扰
• 年，卷（期）: 2011,（8）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 768-773
• 分类号: R739.4
• 字数: 5236字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1671-8925.2011.08.004

摘要

目的 研究RNA干扰技术(RNAi)沉默Hedgehog(Hh)信号转导途径中核心转录因子Gli1基因表达后对U251细胞增殖与凋亡以及下游因子Bcl-2、Bax、cycin D1表达的影响。 方法 合成、转染4对针对Gli1 mRNA不同位点序列的siRNA (58、59、60、61)至人胶质瘤U251细胞，RT-PCR检测细胞Gli1 mRNA的表达，筛选最有效抑制Gli1 mRNA表达的siRNA干扰片段(siRNA-Gli1)；RT-PCR、Western blotting分别检测转染SiRNA-Gli后不同时间U251细胞Gli1mRNA和蛋白的表达，确定转染干扰的时间规律；实验分为3组：siRNA-Gli1组（转染筛选后siRNA-Gli1片断）、siRNA-NC组（转染阴性对照siRNA片断）、siRNA-N组（空白对照）。RT-PCR、Western blotting分别检测各组转染48 h后U251细胞cyclin D1、Bcl-2及Bax mRN和蛋白的表达，MTT、流式细胞术分别检测细胞增殖、凋亡及细胞周期的变化。 结果 干扰片断58、59、60、61、NC的转染效率均达69.2％；RT-PCR检测显示转染后48 h U251-60细胞无明显Gli1 mRNA表达，选择60作为最佳干扰片段siRNA-Gli1转染U251细胞,48h时无明显Gli1 mRNA和蛋白表达，确定48 h为转染干扰的最佳时间；转染48 h后与siRNA-N和siRNA-NC组相比,siRNA-Gli1组U251细胞Bcl-2、cyclin D1 mRNA和蛋白表达下调、Bax mRNA和蛋白上调，差异均有统计学意义(P＜0.05)。MTT检测显示24、48和72 h时siRNA-Gli1组细胞增殖抑制率均明显高于siRNA-NC和siRNA-N组，差异均有统计学意义(P＜0.05)。流式细胞术结果显示siRNA-Gli1组细胞凋亡率高于siRNA-NC和siRNA-N组，差异有统计学意义(P＜0.05)，且siRNA-Gli1组G1/G0期细胞比例增加,S期细胞明显减少。 结论 针对Gli1基因设计合成的siRNA-Gli1能明显抑制人胶质瘤U251细胞生长并能诱导其凋亡，其机制可能与下调cyclin D1、Bcl-2的表达，上调Bax的表达有关。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李卉	新疆医科大学附属肿瘤医院神经外科	57	123	5.0	7.0
2	李惠武	新疆医科大学附属肿瘤医院神经外科	57	128	5.0	7.0
3	白靖平	新疆医科大学附属肿瘤医院神经外科	158	645	12.0	17.0
4	柳琛	新疆医科大学附属肿瘤医院神经外科	71	273	9.0	12.0
5	段明军	新疆医科大学附属肿瘤医院神经外科	21	67	5.0	7.0
6	田海龙	新疆医科大学附属肿瘤医院神经外科	10	16	3.0	3.0