野生型及突变型乙型肝炎病毒X基因在pGEX-6P-2系统中的克隆、表达、纯化及免疫鉴定

• 作者: 张晓慧 张洪花 李程 杜磊 王昌源 王永康 董格峰 谭炳芹
• 来源期刊: 病毒学报
• 学科: 医学
• 关键词: 乙肝病毒x抗原 野生型 A1762T/G1764A突变型 融合表达 纯化 免疫鉴定
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 页码范围: 427-432
• 页数: 6页
• 分类号: R373.2
• 语种: 中文

摘要

摘要：构建野生型和A1762T/G1764A双突变型乙型肝炎病毒(HBV)X基因原核表达系统，为深入研究HBV X基因及其双突变后对HBV慢性感染者病情发展和肿瘤发生的作用奠定基础。从慢性乙型肝炎患者血清中抽提HBV基因组DNA，经PCR扩增和基因测序，证实并获得野生型及A1762T/G1764A双突变型HBV X基因。应用TA克隆及亚克隆技术将2基因分别插入pGEX-6P-2载体，构建pGEX-6 P-2-hbvxw（野生型）及pGEX-6P-2-hb-Vxm（A1762T/G1764A突变型）重组表达载体；转化入宿主菌进行诱导表达；包涵体复性后，GSTrap FF蛋白纯化柱纯化带有GST标签的野生型和A1762T/G1764A突变型HBV x抗原(HBxAg)；应用SDS-PAGE、 Western blot和ELISA方法对表达的野生型和突变型HBxAg进行鉴定。结果SDS-PAGE证实本研究构建的2个表达系统均能高效表达目的蛋白；复性、纯化后野生型和突变型GST-HBxAg分别达到4.88mg/mL和5.07mg/mL；Western blot鉴定证实所纯化的野生型和突变型HBxAg均能被特异性的单克隆抗体所识别；ELISA方法检测显示2种抗原都能成功包被于微量滴定板上并与乙肝患者血清反应。证实本研究成功地构建了野生型和A1762T/G1764A突变型HBxAg表达系统，为进一步研究A1762T/G1764A基因突变对肿瘤发生学和慢性HBV感染者疾病进展的作用和分子机制奠定了基础。