猪IL-1β与IL-18SYBRGreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立

• 作者: 何孔旺 俞正玉 倪艳秀 吕立新 周俊明 张雪寒 李彬 汪伟 温立斌 王小敏 范红结 茅爱华 郭容利
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪 促炎症细胞因子 IL-1β IL-18 荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2011,（6）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医·水产养殖
• 页码范围: 1289-1294
• 分类号: S854.4
• 字数: 3147字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2011.06.021

摘要

IL-1β和IL-18是重要的促炎症细胞因子,在介导机体炎症反应中起重要作用.为了建立在体外定量检测猪细胞因子IL-1β和IL-18mRNA表达水平的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法,依据GenBank中登录的猪细胞因子基因IL-1β、IL-18及管家基因β-actin核苷酸序列,设计特异性引物,经RT-PCR从3D4猪肺泡巨噬细胞系中克隆和扩增了上述3个因子核苷酸片段,构建含有各自引物扩增序列的重组质粒作为阳性模板,建立了检测IL-1β、IL-18及β-actin SYBR GREE Ⅰ荧光定量PCR方法.该方法起始模板数与Ct值之间线性关系好,相关系数达到0.990以上；特异性强,扩增产物形成单一的特异性熔解峰；敏感性高,初始模板的检出下限达到了1μ11.0×102拷贝；重复性好,组内变异系数均小于4％.