牛型结核分枝杆菌MPT64蛋白的原核表达及纯化

• 作者: 吴仁彪 张瑞 张西臣 程黎庆 聂映 谭为 闫广谋
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 牛型结核分枝杆菌 MPT64蛋白 原核细胞 基因表达 纯化
• 年，卷（期）: 2011,（9）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1054-1056,1060
• 分类号: R378.91+1|Q786
• 语种: 中文

摘要

目的 原核表达并纯化牛型结核分枝杆菌MPT64蛋白.方法 以牛型结核分枝杆菌Vallee株全基因组DNA为模板,PCR扩增MPT64基因,克隆至pET-28a(+)载体,构建重组原核表达质粒pET-MPT64,转化至E.coli BL21 (DE3)中,IPTG 诱导表达.表达产物经SDS-PAGE鉴定后,用Ni-NTA亲和层析纯化,Western blot鉴定纯化蛋白.结果 获得的MPT64基因测序结果与GenBank中登录的MPT64基因核苷酸序列同源性为100%;重组表达质粒pET-MPT64经酶切鉴定表明构建正确；表达的重组MPT64蛋白相对分子质量约为26 000,主要以可溶性形式表达,表达量约占全菌总蛋白的11%；纯化的重组MPT64蛋白纯度达93%,可与抗结核牛血清发生特异性反应.结论 成功原核表达并纯化了牛型结核分枝杆菌MPT64蛋白,其可作为诊断抗原用于新型牛结核病的检测.