波形蛋白介导猪繁殖与呼吸综合征病毒感染Marc-145细胞作用的初步研究

• 作者: 周恩民 张璐 王伟伟 肖一红 马晓春 高继明
• 来源期刊: 病毒学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒 波形蛋白 表达 病毒阻断 N蛋白
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 页码范围: 456-461
• 页数: 6页
• 分类号: S852.4
• 语种: 中文

摘要

摘要：为了研究波形蛋白在介导PRRSV感染过程中的作用，根据GenBank中已发表的波形蛋白序列，设计特异性引物，利用RT-PCR方法从Marc-145细胞中扩增目的基因，克隆人pET-28a，转化表达菌BL21( DE3)中进行诱导表达，用SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物，将表达产物纯化后免疫BALB/c小鼠制备血清，用病毒阻断实验验证PRRSV与波形蛋白及其抗体的关系。用ELISA方法确定了重组波形蛋白与PRRSV结构蛋白N蛋白和囊膜蛋白GP5蛋白之间的关系。结果表明，成功的从Marc-145细胞中扩增出全长的波形蛋白基因，将其克隆入pET-28a，诱导后得到高效表达，表达蛋白纯化后免疫小鼠抗体效价达到105，病毒阻断实验表明波形蛋白能部分阻断PRRSV感染，其抗血清能完全阻断PRRSV感染。ELISA结果表明波形蛋白能与N蛋白结合而不与GP5蛋白结合。此结果为PRRSV感染的细胞的受体机制增添了新的内容，为PRRSV感染过程中受体间的相互作用关系研究奠定基础。