靶向人转录因子FOXM1基因的shRNA慢病毒载体的构建与鉴定

• 作者: 姚珍薇 秦兴发 陈国庆
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: FOXM1 RNA干扰 慢病毒 恶性肿瘤
• 年，卷（期）: 2011,（9）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1050-1053
• 分类号: Q782
• 语种: 中文

摘要

目的 构建并鉴定靶向人转录因子FOXM1基因的shRNA慢病毒载体.方法 设计合成靶向人FOXM1基因的shRNA序列,通过基因重组技术将其连接到含U6启动子及绿色荧光蛋白基因的慢病毒表达载体pLL3.7中,构建shRNA重组质粒pLL-FOXM 1-shRNA.重组质粒经Xba I和Nhe I双酶切及DNA测序鉴定后,与慢病毒包装质粒混合,与脂质体LipofectamineTM 2000共转染至293T细胞中,孵育72 h后收集上清液,高速离心纯化病毒颗粒,并采用逐孔稀释法测定慢病毒滴度.结果双酶切鉴定及测序结果证实,靶向人FOXM1基因的shRNA序列已成功插入pLL3.7中；在293T细胞中成功包装出慢病毒颗粒,病毒滴度为1×108 TU/ml.结论 已成功构建了靶向人FOXM1基因的shRNA慢病毒载体,为进一步研究FOXM1的分子功能奠定了基础.