大黄鱼精子的超低温冻存及细胞结构损伤的检测

• 作者: 姜建湖 杨万喜 竺俊全 闫家强
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 大黄鱼 精子 超低温冻存 单细胞凝胶电泳(SCGE) 荧光双染色-流式细胞术(FCM)
• 年，卷（期）: 2011,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 725-733
• 分类号: S917.4
• 字数: 6141字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2011.04.019

摘要

为了解超低温冻存对大黄鱼精子细胞结构损伤的影响,本研究以Cortland溶液为稀释液,二甲基亚砜(DMSO)及乙二醇(EG)为抗冻剂,0.25 mL的麦细管为冻存管,两步降温法(平放在离液氮面3～4 cm处3～5 min后入液氮中保存)超低温冻存大黄鱼(Pseudosciaena crocea)精子,并用单细胞凝胶电泳(SCGE)技术检测了冻精的DNA损伤,荧光双染色-流式细胞术(FCM)检测了冻精的细胞膜性结构损伤.结果表明,DMSO及EG浓度在5％～20％时,冻精的活力与鲜精相比无显著差异；其中DMSO及EG浓度在10％时,冻精的激活率、运动时间、寿命分别为(87.00±2.45)％、(8.99±0.24) min和(13.11±0.65) min及(87.50±2.52)％、(8.45±0.48)min和(12.84±0.50) min; DMSO及EG浓度在25％和30％时,冻精的活力显著下降.SCGE检测显示,DMSO及EG浓度在5％～20％时,冻精的DNA损伤与鲜精相比差异不显著；DMSO及EG浓度为25％和30％时,冻精的DNA损伤明显加重；冻精的DNA损伤与抗冻剂DMSO及EG的浓度成正相关.FCM检测显示,DMSO及EG浓度在5％～20％时,冻精中线粒体及细胞膜结构保持完整性的精子比例与鲜精相比无显著差异；DMSO及EG浓度在25％和30％时,冻精中的线粒体及细胞膜结构保持完整性的精子比例明显下降.分析认为,较高浓度的DMSO及EG是引起冻精活力下降,DNA、线粒体及细胞膜结构损伤加重的主要原因；为确保大黄鱼冻精的质量,应以10％DMSO或10％EG为抗冻剂.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	竺俊全	宁波大学教育部应用海洋生物技术重点实验室	107	1123	20.0	27.0
2	杨万喜	浙江大学生命科学学院精子实验室	37	715	17.0	25.0
3	闫家强	宁波大学教育部应用海洋生物技术重点实验室	11	108	8.0	10.0
4	姜建湖	宁波大学教育部应用海洋生物技术重点实验室	9	88	7.0	9.0