泡桐丛枝植原体抗原膜蛋白抗血清的制备及应用

• 作者: 周涛 朱水芳 李怀方 林彩丽 牟海青 田国忠 范在丰 赵文军
• 来源期刊: 植物病理学报
• 学科: 农学
• 关键词: 泡桐丛枝病 植原体 抗原膜蛋白 大肠杆菌
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 所属期刊栏目: 病原学
• 页码范围: 161-170
• 分类号: S432.1
• 字数: 5476字
• 语种: 中文

摘要

根据报道的泡桐丛枝植原体(Paulownia witches'-broom phytoplasma,PaWB)抗原膜蛋白(antigenic membrane protein,AMP)基因的核苷酸序列设计引物,提取发病泡桐总DNA,经PCR扩增并成功克隆泡桐丛枝植原体amp基因.序列分析表明,amp基因由696个核苷酸组成,编码231个氨基酸残基,与GenBank中登录的2个泡桐丛枝植原体的膜蛋白核苷酸序列同源性为100%.将amp基因91-604 nt部分序列(命名为ampd)克隆到原核表达载体pGEX-4T-3,诱导后,经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,表明融合蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中得到了高效表达.以纯化的带GST标签的AMPD融合蛋白为抗原免疫德国大白兔,制备了PawB-AMPD抗血清.利用该血清,通过Western印迹、点印迹、ELISA、间接免疫荧光和免疫捕获PCR试验均能在发病泡桐组织中特异检测到泡桐丛枝植原体.