簇分化抗原74基因转染对人脐静脉内皮细胞ECV304特性的影响

• 作者: 姜艳红
• 来源期刊: 华南国防医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 簇分化抗原74 人脐静脉内皮细胞 基因转染 人类白细胞抗原
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 386-390
• 分类号: R34
• 字数: 3387字
• 语种: 中文

摘要

目的 探讨簇分化抗原74(cluster of differentiation 74,CD74)基因在人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)的转染条件和CD74基因转染对细胞特性及功能的影响,为深入研究基于调节CD74表达的生物治疗打下基础.方法 ①将含有CD74 cDNA的pCMV-CD74增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)质粒通过转化大肠杆菌进行扩增、质粒提取、并经酶切和测序进行鉴定；②将pCMV-CD74质粒转染脐静脉内皮细胞ECV304,通过EGFP荧光质粒对ECV304细胞进行转染率的检测；③采用免疫组化法和Western blot,检测转染前后ECV304细胞CD74分子的表达；采用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(real-time reverse transcriptase polymerase chain reaction,RT-PCR)法检测转染后CD74 mRNA水平的表达；④pCMV-CD74质粒转染前后ECV304细胞功能相关基因人类白细胞抗原-A(human leukocyte antigens A,HLA-A)、人类白细胞抗原-DR (human leukocyte antigens DR,HLA-DR)、γ-干扰素受体(interferon-γ receptor,IFNGR)表达的检测:采用RT-PCR比较转染前后脐静脉内皮细胞各功能相关基因的表达；⑤应用RT-PCR分析软件分析实验数据.结果 转染前后ECV304细胞HLA-A△Ct值分别为9.4881和12.1097,2 -△△Ct为6.1543大于2,说明转染前后HLA-A表达有统计学差异；IFNGR △Ct值分别为4.9828和5.5228,2-ΔΔCt为1.4539小于2,转染前后无统计学差异；HLA-DR△Ct值分别为14.1098和14.7924,2 - ΔΔCt为1.3036小于2,转染前后无统计学差异.结论 人脐静脉内皮细胞ECV304表达HLA-A、HLA-DR、IFNGR和CD74mRNA; pCMV-CD74转染可增加ECV304细胞CD74基因和膜分子的表达,增加HLA-A基因的表达,但不增加HLADR和IFNGR的表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	姜艳红	河南省肿瘤医院检验科	8	20	3.0	4.0