硫化物-醌氧化还原酶(SQR)基因真核表达载体的构建及表达

• 作者: 于峰祥 于建宁 刘泉 徐小波 徐志伟 潘伟芹 王公金 花卫华
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 硫化物醌氧化还原酶 重组质粒 真核表达
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医·水产养殖
• 页码范围: 1043-1046
• 分类号: Q786
• 字数: 2754字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2011.05.023

摘要

探讨SQR基因真核表达载体pcDNA3.1(-)-SQR-Myc的构建及其在真核细胞中的表达.根据已知荚膜红杆菌SQR基因序列设计5’端和3’端引物,采用PCR方法获得SQR基因,通过pMD-18T载体构建得到中间质粒pMD-18T-SQR-Myc;采用限制性内切酶Xho Ⅰ和Kpn Ⅰ双酶切该中间质粒,将SQR基因插入真核表达载体pcDNA3.1(-)相应酶切位点,获得重组质粒pcDNA3.1(-)-SQR-Myc;采用脂质体法瞬时转染HEK293细胞并进行Western blot蛋白鉴定.结果显示:该研究已成功构建了真核表达载体pcDNA3.1(-)-SQR-Myc,质粒测序及酶切结果完全正确,并且SQR能够在HEK293细胞系中正常表达.