定点突变巴曲酶在毕赤酵母中的克隆与表达

• 作者: 兰海英 张宏杰 徐梅 李娜 杨宇 王宏英 薛百忠 薛雁
• 来源期刊: 蛇志
• 学科: 医学
• 关键词: 突变巴曲酶 类凝血酶 巴斯德毕赤酵母 克隆和表达 偏好密码子 套叠PCR
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 105-110
• 分类号: Q78|R977.3
• 字数: 4498字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-5639.2011.02.004

摘要

目的 为避免毕赤酵母分泌的Kex2蛋白酶对发酵液中所表达的巴曲酶的降解.利用重叠PCR方法对巴曲酶基因进行定点突变,将巴曲酶基因第45位的Arg突变为Lys.方法 将突变后的基因克隆到酵母分泌型表达载体pPICZαA中,将重组载体酶切线性化后经电转化转入巴斯德毕赤酵母细胞,筛选鉴定转化子,经摇瓶发酵甲醇诱导,酵母菌分泌表达有凝血活性的定点突变巴曲酶,经SDS-PAG电泳、免疫印迹确定其分子量为32 kD.结果发酵罐的表达量达到52 KU/ml发酵液,较重组天然巴曲酶的表达量提高了73.3%.结论 定点突变巴曲酶的表达量比重组天然巴曲酶的表达量有显著提高,表达的突变巴曲酶同样具有凝血活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	薛雁		17	53	5.0	6.0
2	徐梅		9	28	4.0	4.0
3	王宏英		17	53	5.0	6.0
4	兰海英		3	19	3.0	3.0
5	李娜		7	17	2.0	3.0
6	杨宇		6	13	1.0	3.0
7	张宏杰		4	11	1.0	3.0