金属硫蛋白1h与常染色质组蛋白甲基转移酶1结合调节组蛋白H3K9甲基化并抑制肺癌细胞周期及运动

• 作者: 刘俊 吴非 李墨 王佐周 韩昱晨 韩艳玲
• 来源期刊: 肿瘤
• 学科: 医学
• 关键词: 肺肿瘤 组蛋白赖氨酸N-甲基转移酶 金属硫蛋白 甲基化 细胞周期 细胞运动
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 页码范围: 4-10
• 分类号: R734.2
• 字数: 5743字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3781/j.issn.1000-7431.2011.01.002

摘要

目的:观察常染色质组蛋白甲基转移酶l(euchromatic histone methyltransferase 1,EHMT1)与金属硫蛋白1h(metallothionein lh,MTlh)的相互作用及定位,探讨其对组蛋白H3K9甲基化和肺癌细胞生物学行为的影响及可能的作用机制.方法:将pGBKT7-MTlh质粒与pGADT7-EHMT1质粒共同转化至酵母菌株AH109,进行酵母双杂交实验.将pcDNA4/TO/myc-hisA/MT1h与pcDNA6/TR质粒共转染肺癌细胞株A549和A2,并用四环素诱导MT1h表达后,采用免疫共沉淀和激光共聚焦法检测MT1h、标签蛋白c-myc和EHMT1蛋白的表达及定位:运用组蛋白H3K9甲基转移酶试剂盒检测甲基化转移酶活性,Western印迹法检测三甲基化的组蛋白H3K9表达;FCM和克隆形成实验检测MT1h表达对细胞增殖的影响;划痕实验和Bordend,室法检测MT1h对细胞迁移的影响.结果:实验证实MTlh与EHMTl存在直接作用,且二者共定位于细胞核.诱导MT1h表达后,组蛋白甲基化转移酶活性升高,并且MTlh与组蛋白赖氨酸H3K9三甲基化密切相关.功能分析显示,MT1h稳定转染的肺癌细胞多处于G0期,细胞运动和迁移能力降低.结论:MT1h与EHMT1在细胞核内直接作用,可能通过调节组蛋白H3K9甲基化来发挥抑癌基因的作用.