骨骼肌特异表达载体的构建与验证

• 作者: 于永生 张树敏 曹阳 罗晓彤
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 合成启动子 肌肉特异表达载体 ω-3脂肪酸去饱和酶 体外验证
• 年，卷（期）: 2011,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 14-17
• 分类号: Q782
• 字数: 2099字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-311X.2011.06.141

摘要

目的:构建肌肉特异性表达线虫ω-3脂肪酸去饱和酶的肌肉特异性载体,证明其表达的有效性.方法:化学合成292bp的带有肌肉特异性转录因子结合位点的DNA序列,然后与线虫ω-3脂肪酸去饱和酶基因cDNA、去除CMV启动子的表达载体pcDNA3.1连接构成肌肉特异性表达载体pcDNA3.1 - SF,4w龄C57BL/6小鼠肌肉注射该重组载体,RT - PCR检测证明其表达有效性.结果:DNA测序结果证明合成的292 bp片段带有肌肉特异性表达元件；PCR鉴定显示启动子片段正确地插入到目的基因上游；RT - PCR鉴定显示肌肉内ω-3脂肪酸去饱和酶基因得到有效转录.结论:该试验为在转基因动物的肌肉中表达外源基因奠定了基础.