棕点石斑鱼Piscidin样肽基因的克隆及其成熟肽的原核表达

• 作者: 何凡 刘志刚 邓利 邱聪龄 陈大玮 马一见
• 来源期刊: 渔业科学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 抗菌肽 Piscidin 基因克隆 原核表达 棕点石斑鱼
• 年，卷（期）: 2011,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 126-133
• 分类号: S917
• 字数: 5846字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-7075.2011.04.019

摘要

以简并引物通过RT-PCR从重要经济海水鱼类棕点石斑鱼Epinephelus uscoguttatus白细胞中扩增出一条388bp具有完整编码框的cDNA序列.Blast分析初步显示,该序列属于鱼类抗菌肽Piscidin家族的一员,将其命名为棕点石斑鱼Piscidin样肽(GU592793),推导氨基酸序列具有界定鱼类Piscidin的以下共同特征:(1)预测的信号肽序列与其他Piscidin的同源性较高,在60％～95％之间;(2)推测的成熟肽N端6个氨基酸残基富含Phe、Ile及His;(3)成熟肽第8个和第13个氨基酸位点均为Gly.NJ进化树分析表明,该cDNA推导的氨基酸序列与赤点石斑鱼Epinephelusakaara piscidin-like peptide (ACE78290)、斜带石斑鱼Epinephelus coioides Piscidin-like peptide(ACE78291)以高达81％的支持率聚为一支.也表明本研究成功克隆到棕点石斑鱼首条PiscidincDNA序列.推测的成熟肽为两亲性阳离子肽,等电点12.48,Schiffer-Edmunson预测其二级结构呈a螺旋构型.将推测的成熟肽序列亚克隆至pET-32a构建融合表达载体pET-32a-pis(EF),并在大肠杆菌 E.coli Origami(DE3)中成功表达出融合蛋白,以1mmol/ml IPTG于30℃进行诱导表达,4h可获得大量表达,目的蛋白以包涵体形式存在.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘志刚	深圳大学医学院	324	1724	17.0	23.0
2	邓利	深圳大学生命科学学院	22	200	10.0	13.0
3	陈大玮	深圳大学生命科学学院	7	61	5.0	7.0
4	邱聪龄	深圳大学生命科学学院	2	4	1.0	2.0
5	何凡	深圳大学生命科学学院	2	6	2.0	2.0
6	马一见	深圳大学生命科学学院	2	17	2.0	2.0