芝麻高纯度线粒体DNA提取技术研究

• 作者: 刘佳 吕海霞 张晓燕 张秀荣 张艳欣 王林海 黎冬华
• 来源期刊: 华北农学报
• 学科: 农学
• 关键词: 芝麻 mtDNA 提取 Dnase处理
• 年，卷（期）: 2011,（3）
• 页码范围: 90-94
• 分类号: S565.03
• 字数: 4012字
• 语种: 中文

摘要

以2个芝麻品种黄化苗为试验材料,通过比较植物线粒体DNA(mtDNA)提取过程中的关键影响因素DNase处理时间,建立了一种经济、快速、高效的芝麻mtDNA提取方法.该方法分别通过匀浆化处理、2 400 g离心15min结合12 000 g离心12 min的差速离心方法分离获得粗制线粒体,再经过DNase酶切处理1.5 h去除基因组DNA的污染,然后经0.6 m0l/L蔗糖衬垫离心获得纯的线粒体,通过SDS-蛋白酶K方法裂解线粒体获得芝麻mtDNA.经过核酸蛋白分析仪分析表明:本技术每1 g芝麻黄化苗能获得1 P,g以上mtDNA;通过1.0%琼脂糖凝胶电泳检测表明获得mtDNA完整,无明显降解;并利用三类特异引物(核基因特异引物beta-actin、线粒体基因特异引物rrn26S以及叶绿体基因特异引物ARCP5)进行PCR检测表明提取的mtDNA为高纯度.芝麻高纯度mtDNA提取技术的建立,为研究与芝麻线粒体基因有关的性状(如细胞质雄性不育、抗逆性等)奠定了技术基础.