中华绒螯蟹蜕皮抑制激素基因全长cDNA克隆和重组表达

• 作者: 刘逸尘 孙妍 孙金生 张亦陈 杨卫军 王宇凡 王雪惠 耿绪云
• 来源期刊: 水生生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 中华绒螯蟹 蜕皮抑制激素基因 组织表达 重组表达 纯化
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 页码范围: 210-217
• 分类号: Q781|Q786
• 字数: 5866字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1035.2011.00210

摘要

根据实验室分离自中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)的一种蜕皮抑制激素(Molting-inhibiting hormone,MIH)N端氨基酸测序结果设计简并引物,采用RACE方法,首次从中华绒螯蟹眼柄中克隆到蜕皮抑制激素基因全长cDNA(Es-MIH,GenBank登录号:DQ341280),该基因全长为1457 bp,开放阅读框为330 bp,编码110个氨基酸(含有35个氨基酸的信号肽);其成熟肽包含C7-C44、C24-C40和C27-C53三个二硫键,有典型的CHH家族结构域.该cDNA编码的氨基酸序列与地蟹(Gecarcinus lateralis)MIH同源性最高,达到了85%.Northern杂交和半定量RT-PCR显示蜕皮间期成体蟹仅在眼柄中有MIH基因表达,提示该基因的表达具有一定组织特异性.利用pCR(R)T7/NT TOPO(R)TA系统重组表达MIH成熟肽,纯化的重组蛋白得率为0.3 g/L,纯化产物经质谱鉴定为中华绒螯蟹MIH.研究解决了CHH家族神经肽在机体中的表达量少,直接纯化较难的问题,为深入研究MIH的作用机制和在生产上控制中华绒鳌蟹蜕皮和生长奠定了基础.