厌氧菌株Clostridium sp.WGC702的筛选及其β-葡萄糖苷酶基因的克隆

• 作者: 杨霞 武波 沈建涛 申佩弘 蒋承建
• 来源期刊: 工业微生物
• 学科: 生物学
• 关键词: WGC702 筛选 基因文库 β-葡萄糖苷酶基因 克隆
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 页码范围: 21-25
• 分类号: Q93
• 字数: 2666字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-6678.2011.01.005

摘要

从沼气池中筛选一株产β-葡萄糖苷酶的厌氧菌菌株WGCT02,基于16S rDNA序列及生理特性将其确定为梭菌属,命名为Clostridium sp.WGC702.用Bam HI不完全酶切WGC702的总DNA,回收2～10 kb范围内的DNA片段,连接到pGEM-3zf(+)载体上,电转化至大肠杆菌E.coli DH5α中构建基因文库,利用七叶苷平板筛选到120个能产黑色水解圈的阳性克隆.将其中一个含3.5 kb左右大小的外源片段的阳性克隆子进行测序,结果发现其中含有一个1 347 bp大小的完整ORF框,进一步分析表明该片段编码448个氨基酸组成的蛋白质,氨基酸序列与来自Clostridium cellulovorans 743B(登录号为EES30417.1)的β-葡萄糖苷酶具有48%的同源性,其预测的等电点和分子量分别为4.94和53 978.6 Da,可能为一个新的β-葡萄糖苷酶基因.