斑点叉尾鮰病毒“自杀性”DNA疫苗的构建及其体外表达检测

• 作者: 刘学芹 刘玉林 吴兵 尹殿卯 李莉娟 熊海林 王卫民 王敏 黄锋涛
• 来源期刊: 水生态学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 斑点叉尾鮰病毒 “自杀性”DNA疫苗 构建 表达
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 84-88
• 分类号: Q343.1
• 字数: 3651字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1003-1278.2011.01.015

摘要

根据CCVORF6基因序列,设计合适的引物,扩增ORF6基因,分别将其克隆到＂自杀性＂DNA疫苗载体pS-FV与常规DNA疫苗载体pcDNA3.1（＋）中,转化感受态细胞DH5α后提取质粒,构建斑点叉尾鮰（Ictalurus punc-tatus）＂自杀性＂DNA疫苗ps-ORF6与常规DNA疫苗pcd-ORF6,利用转化后的大肠杆菌菌液为模板进行PCR扩增、提取质粒酶切鉴定以及序列测定等方法证实重组质粒构建正确。将重组质粒转染人胚肾细胞（293T）,间接免疫荧光试验表明ORF6均获得表达,但＂自杀性＂DNA疫苗的表达效果不如常规DNA疫苗,该研究为这2种疫苗进一步的鱼体试验奠定了基础。