不同探针大小、标记物及反应底物对马铃薯类病毒杂交检测的影响

• 作者: 刘尚武 吕典秋 吕文河 宿飞飞 李勇 王绍鹏 邱彩玲
• 来源期刊: 植物病理学报
• 学科: 农学
• 关键词: 马铃薯纺锤块茎类病毒 探针 核酸斑点杂交 标记
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 所属期刊栏目: 病原学
• 页码范围: 154-160
• 分类号: S435.313
• 字数: 3899字
• 语种: 中文

摘要

灵敏可靠地检测马铃薯纺锤块茎类病毒(Potato spindle tuber viroid,PSTVd)对脱毒种薯的生产具有重要意义.本研究探索了影响核酸杂交检测技术的关键因素.通过基因克隆技术构建了插有PSTVd全长单体、双体及片段的载体.分别以地高辛和同位素为标记物,利用PCR和转录标记技术制备cDNA和RNA探针.比较探针大小、标记物、标记方法、反应底物等对检测灵敏度的影响.结果显示,以地高辛为标记物,利用PCR标记制备的PSTVd双体cDNA探针,在以CDPStar为底物,通过在柯达X-OMAT BT胶片进行化学发光反应来分析结果的检测灵敏度最高,可以检测到0.05pg总RNA中的PSTVd,是国外报道检测灵敏度的500倍.利用核酸斑点杂交技术检测PSTVd具有灵敏度高,一次可检测样品数量多等特点,对于大规模PSTVd检测更加方便可行.