玉米叶绿体铁氧还蛋白1的原核表达及部分性质分析

• 作者: 冯爱花 李静 程备久 范军 陈宗梅
• 来源期刊: 核农学报
• 学科: 农学
• 关键词: 铁氧还蛋白(Fd) Fd1 玉米 重组表达 纯化 铁硫簇
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 页码范围: 62-66
• 分类号: S5
• 语种: 中文

摘要

叶绿体铁氧还蛋白(Fd)通过活性中心的铁硫簇传递还原力,在各种氧化还原途径中起重要作用.本研究中,氨基酸序列比对显示玉米中5种Fd的叶绿体导肽同源性很低,而去除导肽的成熟蛋白氨基酸序列具有很高的同源性.采用RT-PCR技术从玉米幼叶总RNA中克隆了编码成熟Fd1的基因.并分别插入pQE 80和p28SUMO表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),表达的N端含有组氨酸标签的Fd1(His-Fd1),和含有组氨酸标签的小类泛素修饰蛋白(SUMO)的Fd1(HisSUMO-Fd1),用Ni-NTA层析介质亲和纯化,SDS-PAGE显示纯化的His-Fd1为一条带,亚基分子量约12kD.纯化的HisSUMO-Fd1用专一性蛋白酶Ulp除去HisSUMO,获得纯化的Fd1.紫外可见光谱扫描显示纯化的HisSUMO-Fd1溶液在315nm、415nm和459nm有特异吸收峰,电子顺磁共振波谱分析表明Fd1中存在[2Fe-2S].SDS-PAGE显示多种玉米幼叶可溶性蛋白被固定化的His-Fd1吸附.