花鲈免疫球蛋白的分离纯化及部分特性分析

• 作者: 许娜娜 赵海泉 钱冬
• 来源期刊: 中国水产科学
• 学科: 农学
• 关键词: 花鲈 免疫球蛋白 纯化 亲和层析
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 页码范围: 103-109
• 分类号: S942
• 字数: 5104字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1118.2011.00103

摘要

分离纯化了花鲈(Lateolabrax japonicus)血清免疫球蛋白(Ig),并对其特性进行初步研究与分析.采用山羊-IgG(Goat-IgG)免疫花鲈并制备血清,分别采用硫酸铵分级沉淀法、A蛋白亲和层析法及Goat-IgG偶联亲和层析法提取花鲈Ig,对提取组份进行了蛋白浓度测定、间接ELISA效价测定、SDS-PAGE和Western-blotting分析.结果表明,采用硫酸铵分级沉淀法提取的花鲈Ig主要集中在硫酸铵饱和度为30%～50%的区间,其中45%饱和度硫酸铵富集的的抗体比活最高,ELISA效价为2×104/mg蛋白,比血清ELISA效价提高2.2倍;A蛋白柱亲和层析可得单一蛋白峰,洗脱峰集中在洗脱体积0.8～1.6 mL,处,占洗脱蛋白总量的76.2%,峰值的ELISA效价为1.37×105/mg蛋白,抗体得率为2.57%;Goat-IgG偶联Sephrose 4B亲和柱层析也可得单一蛋白峰,洗脱峰集中在洗脱体积1.4～2.8 mL处,占洗脱蛋白总量的72.4%,峰值的ELISA效价为1.39×105/mg蛋白,抗体得率为2.63%.以上3种提取方法均可得到79 kD的重链和29 kD轻链,表明可得到纯化的免疫球蛋白;采用鼠抗花鲈Ig血清和单抗AA5经Western-blotting证实提取成份为花鲈Ig.本研究表明,A蛋白柱和Goat-IgG偶联柱亲和层析均可用于花鲈Ig的提取,其中A蛋白柱法获得的洗脱峰值更为集中,抗体效价高,且提取过程不需要Goat-IgG免疫鱼体,是一种更为有效的免疫球蛋白提取方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	钱冬	浙江省淡水水产研究所鱼病室	38	692	16.0	25.0
2	赵海泉	安徽农业大学生命科学学院	54	608	13.0	23.0
3	许娜娜	安徽农业大学生命科学学院	4	33	3.0	4.0