急性病毒性坏死病毒dUTPase基因的克隆、表达及其产物的酶学活性分析

• 作者: 任伟成 曲朋 李赟 梁彦韬 王崇明 贾志磊
• 来源期刊: 水产学报
• 学科: 农学
• 关键词: 栉孔扇贝 dUTP焦磷酸酶 急性病毒性坏死病毒 原核表达 酶学活性
• 年，卷（期）: 2011,（9）
• 页码范围: 1320-1326
• 分类号: Q785|S917
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1231.2011.17463

摘要

根据已测定完成的栉孔扇贝急性病毒性坏死病毒(acute viral necrosis virus,AVNV)基因组序列,设计特异性引物,以提取的发病扇贝组织总DNA为模板,PCR扩增得到编码AVNV dUTPase的开放阅读框ORF074,将产物克隆至原核表达载体pET32a(+)中,构建表达质粒pET32a-dut.然后,将其转化至E.coli BL21( DE3)进行诱导表达.SDS-PAGE检测显示,诱导表达蛋白分子量约为46ku,与预期表达蛋白大小一致.经Western-blotting及质谱分析鉴定,所表达蛋白即为重组dUTPase.表达产物经Co2柱纯化后进行酶学活性测定.结果显示,重组dUTPase能特异性催化dUTP,EDTA可以抑制dUTPase的活性,而Mg2+可以增强其活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王崇明	中国水产科学研究院黄海水产研究所	30	428	12.0	20.0
2	曲朋	中国海洋大学教育部海水养殖重点实验室	4	17	3.0	4.0
6	贾志磊	中国海洋大学教育部海水养殖重点实验室	2	14	2.0	2.0
10	梁彦韬	中国水产科学研究院黄海水产研究所	1	8	1.0	1.0