大豆fad基因反义表达载体构建及转化烟草研究

• 作者: 刘艳菊 周延清 姚换灵 李敏 田苗苗 邢延豪
• 来源期刊: 广西植物
• 学科: 生物学
• 关键词: 大豆 反义油酸脱饱和酶基因 根癌农杆菌 烟草 遗传
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 页码范围: 111-116,123
• 分类号: Q75
• 字数: 5214字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-3142.2011.01.023

摘要

使用PCR方法从大豆基因组DNA中扩增出大豆油酸脱饱和酶基因fad2-1,连接到pMD18-T载体中,转化大肠杆菌JM109菌株.测序后,用DNAstar软件进行同源性比对.然后将正确的序列反向克隆到表达载体pBt,并转化农杆菌菌株LBA4404,经双酶切鉴定和PCR扩增检测,获得具有该基因反向序列的农杆菌工程菌,转化烟草无菌苗叶片外植体,经过组织培养和卡那霉素抗性筛选,获得抗性烟草转化植株共75株,PCR扩增出npt-II基因,RT-PCR检测到大豆反义油酸脱饱和酶基因转录产物和GC-MS测定其油酸含量增加而亚油酸含量降低.结果表明,克隆的fad2-1基因为1196bp,基因序列与NCBI中已发表的基因fad2-1序列蛋白质相似性达到96.7%,反义大豆fad2-1基因在烟草基因组中整合表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周延清	河南师范大学生命科学学院	85	1261	15.0	33.0
2	李敏	河南师范大学生命科学学院	26	108	4.0	10.0
3	田苗苗	河南师范大学生命科学学院	4	16	2.0	4.0
4	姚换灵	河南师范大学生命科学学院	6	59	5.0	6.0
5	邢延豪	河南师范大学生命科学学院	4	72	2.0	4.0
6	刘艳菊	河南师范大学生命科学学院	2	9	1.0	2.0