尼罗罗非鱼微阵列Fosmid基因组文库的构建及基因筛选

• 作者: 叶凯 吴风瑞 孙运侣 曾圣 李明辉 杨世杰 焦静 熊传奇 王德寿 蒋汶洮 顾源 魏莹莹 黄宝锋
• 来源期刊: 水产学报
• 学科: 农学
• 关键词: 尼罗罗非鱼 基因组文库 微阵列 基因筛选
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 页码范围: 27-34
• 分类号: Q785|S917
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1231.2011.17136

摘要

以pCC2FOS为载体构建尼罗罗非鱼Fosmid基因组文库,共挑选115 200个单菌落,保存在300块384孔样品板中,构建4 800个行池、7 200个列池、300个板池和25个超级池,形成微阵列,并对其进行复制备份.该文库插入片段平均长度约为40 kb,覆盖约罗非鱼基因组的3倍.连续传代实验研究表明,文库具有良好的稳定性.由于构建超级池-板池-行、列池三级池系统形成的微阵列,有助于快速、准确、有效地筛选目的基因,仅需77个PCR反应(超级池25+板池12+行池16+列池24)就能筛选到含有目的基因的一个单克隆,解决了普遍存在的文库筛选难题.通过文库尝试筛选18个与性别分化和生长相关基因,均获得2～5个阳性克隆,说明文库具有较好的实用性.