通过定向进化策略提高酯酶立体选择性的研究

• 作者: 于洪巍 汤晓玲
• 来源期刊: 高校化学工程学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 酯酶 手性选择性 定向进化 易错PCR 高通量筛选
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 所属期刊栏目: 生物化工
• 页码范围: 283-288
• 分类号: Q344.1
• 字数: 4809字
• 语种: 中文

摘要

对菌株Rhodobacter sphaeroides的RSP-2728酯酶基因进行立体选择性定向进化研究,建立了有效的定向进化策略,以及通过扁桃酸甲酯水解反应所产生的酸根离子浓度来监测酶活的高通量筛选方法.利用易错PCR技术,进行了三轮突变,获得了突变株A6A5,B7F11和C8G1,对映体选择性(E值)从3.13分别提高到5.32,8.77和14.01;提高了1.7倍,2.8倍和4.5倍.序列分析表明,突变体A6A5有一个62位上的氨基酸发生了改变,由原先的天冬酰胺变成了酪氨酸;突变体B7F11的62位的天冬酰胺变成了酪氨酸,145位上的亮氨酸变成了组氨酸;突变体C8G1的62位的天冬酰胺变成了半胱氨酸,145位的亮氨酸变为组氨酸.利用定向进化策略能够有效地提高酶的立体选择性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	于洪巍	浙江大学化学工程与生物工程学系	12	21	3.0	4.0
2	汤晓玲	浙江大学化学工程与生物工程学系	1	5	1.0	1.0