绵羊Myostatin基因敲除载体的构建

• 作者: 吕延飞 孙丹 张莉 杜立新 路国彬 金梅 陆健 魏彩虹
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 农学
• 关键词: 绵羊 Myostatin基因 基因敲除 置换型敲除栽体
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 93-97
• 分类号: S826|Q78
• 字数: 4117字
• 语种: 中文

摘要

根据Myostatin基因突变可导致肌肉量激增而产生"双肌"表型的特点,构建绵羊Myostatin基因置换型敲除栽体.利用LA-PCR技术成功地扩增得到绵羊Myostatin基因同源臂序列,其中同源长臂4.9kb,包括全部的exonl,intronl,exon2及部分启动子和大部分intron2;同源短臂1.1kb,包括部分exon3和31非翻译区序列,将二者连入PloxpⅡ正负筛选敲除骨架载体,利用骨架载体上Neo基因替代Myostatin基因的exon3,从而成功构建专门针对Myostatin第3外显子区域缺失的置换型敲除载体PloxpⅡ-OVIS-MSTN.酶切和测序鉴定证明载体构建正确,为后续获得绵羊Myostatin基因缺失型体细胞株奠定试验基础.