苏云金芽胞杆菌大质粒pBMB28的克隆

• 作者: 孙明 尚卉 戚军良 朱义广 朱倩 纪芳
• 来源期刊: 遗传
• 学科: 医学
• 关键词: 苏云金芽胞杆菌 质粒 BAC文库 染色体步移 末端测序
• 年，卷（期）: 2011,（10）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 1141-1146
• 分类号: R3
• 字数: 4702字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1005.2011.01141

摘要

苏云金芽胞杆菌幕虫亚种YBT-020具有典型的晶胞粘连表型,在前期的研究中,通过质粒消除实验,推测晶胞粘连现象与YBT-020内生质粒pBMB28有关.为了定位质粒pBMB28上控制品胞粘连表型的基因,首先对质粒pBMB28进行克隆.利用穿梭载体pEMB0557,成功构建了苏云金芽胞杆菌YBT-020的基因组人工染色体(BAC)文库.前期的研究表明晶体蛋白基因cry28Aa定位在质粒pBMB28上,根据cry28Aa基因序列设计引物,从文库中筛选到含有cry28Aa的重组质粒pBMB231.镜检和SDS-PAGE证明质粒pBMB231转化无晶体突变株BMB171形成的重组子BMB231可以产生Cry28Aa晶体蛋白,但不能恢复晶胞粘连表型.对重组质粒pBMB231的插入片段末端序列测定并设计引物筛选文库,通过染色体步移方式得到4个可以重叠覆盖质粒pBMB28不同区域的克隆子,从而克隆了该质粒.对这4个克隆子末端测序和酶切分析,测算出该质粒的大小约为140 kb.进一步确定应用基因组BAC文库以及重叠片段筛选的方法,可以快速有效的克隆苏云金芽胞杆菌大质粒.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱义广	华中农业大学生命科学技术学院农业微生物学国家重点实验室	2	2	1.0	1.0
2	戚军良	华中农业大学生命科学技术学院农业微生物学国家重点实验室	1	1	1.0	1.0
3	尚卉	华中农业大学生命科学技术学院农业微生物学国家重点实验室	1	1	1.0	1.0
4	纪芳	华中农业大学生命科学技术学院农业微生物学国家重点实验室	1	1	1.0	1.0
5	朱倩	华中农业大学生命科学技术学院农业微生物学国家重点实验室	1	1	1.0	1.0