大鼠视网膜干细胞与神经干细胞体外增殖、分化特点比较

• 作者: 刘早霞 王晨光 王淑荣 苏冠方 齐首楠
• 来源期刊: 中华眼视光学与视觉科学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 干细胞,视网膜 干细胞,神经 细胞培养技术 细胞分化 大鼠,Wistar
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 所属期刊栏目: 视网膜疾病与视觉质量
• 页码范围: 99-103
• 分类号: R4
• 字数: 3962字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1674-845X.2011.02.005

摘要

目的 通过对大鼠视网膜干细胞和神经干细胞体外增殖、分化特点进行比较,进一步明确视网膜于细胞自我更新及向神经细胞方向分化的能力.方法 实验研究.分离出生10 d大鼠睫状体区组织及新生大鼠脑组织,分别应用酶消化法将两种组织制成单细胞悬液,放入含有20 μg/L碱性成纤维细胞生长因子、20μg/L表皮生长因子及1×B27添加剂的无血清DMEM/F12培养液中培养,观察并比较视网膜干细胞及神经干细胞体外增殖的特点.分别取第2代细胞,应用免疫细胞化学染色法检测干细胞特异性抗原神经巢蛋白(nestin)及细胞分裂增殖标志物5-溴脱氧尿核苷(BrdU)的表达.同时,应用含50 ml/L的胎牛血清及1×N2添加剂的培养基促进其分化,观察两种细胞向神经细胞方向分化的特点:分别应用免疫细胞化学染色法对分化后的细胞nestin、神经无标志物神经元特异性烯醇酶(NSE)、神经胶质细胞标志物神经胶质酸性蛋白(GFAP)进行检测,并应用卡方检验对两种干细胞分化后的NSE及GFAP阳性细胞数比例进行比较.结果 两种细胞原代培养48 h后均可见小的球状细胞团悬浮生长,折光性强.原代培养约7 d后传代,传代后细胞能重新形成球状细胞团,应用免疫细胞化学染色方法均可检测到细胞内nestin及BrdU的阳性表达,视网膜干细胞体外增殖的能力较神经干细胞弱.两种细胞均可在血清诱导条件下转变为贴壁生长,并分化出具有神经细胞形态的细胞.诱导第7天进行免疫细胞化学染色,检测出两种干细胞表达nestin阳性细胞数比例分别为(9.5±3.5)%及(9.1±0.7)%.视网膜干细胞分化后NSE及GFAP的阳性细胞数比例分别为(11.2±2.8)%及(18.9+2.1)%,低于神经干细胞分化后两种标志物阳性细胞数比例[(34.1±63)%及(41.9±3.3)%],NSE、GFAP在两组表达的差异均有统计学意义(x2=103.23,P＜0.05;x2=74.36,P＜0.05).结论 来源于睫状体区的大鼠视网膜干细胞形态、体外增殖及可分化特性与神经干细胞相似,但其增殖及分化为神经细胞的能力较神经干细胞弱.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王淑荣	吉林大学第二医院眼科	61	194	7.0	12.0
2	刘早霞	吉林大学第二医院眼科	68	163	7.0	9.0
3	苏冠方	吉林大学第二医院眼科	105	393	10.0	13.0
4	王晨光	吉林大学第二医院眼科	29	70	3.0	7.0
5	齐首楠	吉林大学第二医院眼科	10	26	3.0	4.0