小鼠甘丙肽1型受体在HEK293A细胞中的表达和内化

• 作者: 宫夏霓 徐志卿 徐舒 李慧 李晓晓
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 小鼠甘丙肽1型受体( mGalR1) 基因克隆 真核表达载体 HEK293A细胞 内在化
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 30-34
• 分类号: Q189
• 字数: 4128字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-311X.2011.05.120

摘要

目的:克隆小鼠甘丙肽1型受体( mGalR1)基因,构建其真核表达载体,并观察该基因在HEK293A细胞中的表达和内化.方法:应用RT - PCR方法,以小鼠下丘脑RNA为模板,扩增获得甘丙肽Ⅰ型受体(mGalR1)基因并定向克隆到pEGFP - N1真核表达载体；mGalR1 - pEGFP表达载体瞬时转染HEK293A细胞,利用激光共聚焦显微技术观察mGalR1在给予甘丙肽(10-7mol/L)0、5、10、15min刺激时的内化情况.结果:克隆得到正确的mGalR1基因全长序列,其cDNA为1047bp,共编码348个氨基酸；共聚焦显微镜结果表明mGalR1主要在膜上表达,经甘丙肽刺激5～15min后受体下膜进入胞浆.结论:成功构建真核表达载体mGalR1 - pEGFP并在HEK293A中表达；在甘丙肽刺激下小鼠甘丙肽1型受体存在内化现象.