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摘要:
目的 克隆RNF185全长基因,构建真核表达载体,检测其蛋白表达和亚细胞定位,并探讨RNF185过表达对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响.方法 TRIzol法提取人胚肾HEK293T细胞的总RNA,经RT-PCR反应扩增出RNF185基因,并通过酶切连接将其构建到真核表达载体pCMV-Myc和pEGFP-N1上,阳性克隆经PCR及酶切鉴定后测序.测序正确后抽提质粒作为模板扩增N端截短体,构建其真核表达载体.转染MC3T3-E1检测其蛋白表达及亚细胞定位情况.采用碱性磷酸酶染色法分析RNF185过表达对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响.结果 ①完成了RNF185的分子克隆,构建的真核表达载体pCMV-Myc-RNF185测序正确,所获得的序列与GenBank中收录的序列完全一致,N端截短体测序正确;②成功转染至MC3T3-E1细胞,蛋白相对分子质量大小与预期一致,全长形式定位于质膜;③RNF185及其N端截短体过表达均可抑制MC3T3-E1细胞的成骨分化.结论 RNF185过表达可抑制MC3T3-E1细胞的成骨分化.
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文献信息
篇名 RNF185的克隆及过表达对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响
来源期刊 军事医学 学科 生物学
关键词 环指结构域 泛素蛋白连接酶类 成骨细胞 细胞分化
年,卷(期) 2011,(6) 所属期刊栏目 论著
研究方向 页码范围 447-450
页数 分类号 Q785
字数 2464字 语种 中文
DOI 10.3969/j.issn.1674-9960.2011.06.011
五维指标
作者信息
序号 姓名 单位 发文数 被引次数 H指数 G指数
1 侯树勋 解放军总医院第一附属医院全军骨科研究所 204 1767 20.0 30.0
2 衷鸿宾 解放军总医院第一附属医院全军骨科研究所 26 114 6.0 9.0
3 周颖 解放军总医院第一附属医院全军骨科研究所 29 135 6.0 10.0
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成骨细胞
细胞分化
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北京太平路27号
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