单核苷酸突变基因型PCR - SSP快速检测方法的建立

• 作者: 李小英 杨瑞 王天云
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 医学
• 关键词: 单核苷酸突变 基因型 序列特异性扩增酶链反应
• 年，卷（期）: 2011,（6）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 39-43
• 分类号: R34
• 字数: 4081字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-311X.2011.06.148

摘要

目的:探讨多样本、多基因的单核苷酸突变基因分型操作的PCR - SSP的最优参数,建立最佳反应体系.方法:优化PCR - SSP反应中扩增体系参数,选取优化后的参数做为反应体系；在反应体系已优化的条件下,分别优化解链温度、循环参数.结果:优化后Mg2+、dNTPs、Taq酶、序列特异性引物、内对照引物、DNA模板在20μL反应体系中的终浓度分别为:3.75 μmol/L、0.5m mol/L、2.5U、0.5μmol/L、0.2μmol/L、0.15μg；采用改良的TouchDown做为循环参数,其中DNA变性时间至15min,增加5个起始循环.结论:成功建立了PCR - SSP反应的快速操作体系,扩增条带清晰,普通、琼脂糖凝胶电泳即可检测单核苷酸突变基因型.优化后的体系适合对人、小鼠等各类型DNA样本进行快速多基因单核苷酸多态性分型.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王天云	新乡医学院基础医学院生物化学教研室	76	498	10.0	20.0
2	杨瑞	新乡医学院生命科学技术系	52	214	9.0	12.0
3	李小英	新乡医学院生命科学技术系	36	93	5.0	8.0