中国番茄黄化曲叶病毒编码的RNA沉默抑制子AC4蛋白的核酸结合特性

• 作者: 吴建祥 张馨月 章颉 邓凤林
• 来源期刊: 南京农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 中国番茄黄化曲叶病毒 ACA蛋白 原核表达 电泳迁移率变动试验
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 页码范围: 85-90
• 分类号: Q78|S432.4
• 字数: 4484字
• 语种: 中文

摘要

农杆菌共浸润试验结果表明:中国番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl China virus,TYLCCNV)Y10分离物编码AC4蛋白是RNA沉默抑制子.为了研究RNA沉默抑制子AC4蛋白的作用机制,将TYLCCNV-Y10的AC4基因插入到原核表达载体pET-32a的多克隆位点上,构建重组原核表达载体pET32a-YIOACA.将重组载体导入BL21(DE3)pLysS进行ACA蛋白表达,并在自然条件下纯化蛋白.利用原核表达的ACA蛋白进行电泳迁移率变动试验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA),分析ACA蛋白分别与单、双链siRNA和单、双链长RNA的结合情况.试验结果表明:TYLCCNV-Y10编码的ACA蛋白具有结合单链siRNA和单链长RNA特性,而不与双链siRNA和双链长RNA结合.