NEDD4-1shRNA对U251胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响

• 作者: 于如同 李季林 盛罗平 石琼 陆林其 陈仁辉 陈华 陈雪林 顾泉
• 来源期刊: 中国微侵袭神经外科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 神经胶质瘤 蛋白 NEDD4-1 细胞增殖 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2011,（8）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 366-370
• 分类号: R739.41
• 语种: 中文

摘要

目的 探讨NEDD4-1 shRNA对U251胶质瘤细胞增殖及凋亡的影响.方法 构建NEDIM-1 shRNA表达载体.以不同比例质粒和脂质体转染U251细胞,通过荧光显微镜观察细胞存活情况,优化转染效率.转染48 h后采用Western blot、RT-PCR分别检测NEDD4-1蛋白及mRNA的表达,流式细胞术检测细胞周期,MTT法检测细胞增殖,DAPI荧光染色检测细胞凋亡.结果 NEDD4-1 shRNA表达载体构建成功.脂质体与质粒的最佳转染效率比例为2.5 μl:1 μg,48 h转染效率在60%～700.与对照组比较,转染NEDD4-1 shRNA后,U251胶质瘤细胞NEDD4-1的蛋白及mRNA表达水平均下降(均P<0.05),细胞大多停滞在G<,0>-G<,1>期(均P<0.05),增殖率明显降低(均P<0.05),凋亡率显著增加(均P<0.05).结论 NEDD4-1作为PTEN泛素连接酶,为胶质瘤基因治疗提供靶点.