徐淮山羊LPL基因克隆及其表达产物亚细胞定位的研究

• 作者: 孙敏 张振韬 李碧春 田智泉 秦玉蓉 许峰 阴彦辉 高波
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 脂蛋白酯酶基因 真核表达 NIH-3T3细胞 绿色荧光蛋白
• 年，卷（期）: 2011,（6）
• 所属期刊栏目: 遗传繁育
• 页码范围: 772-778
• 分类号: S827|Q343
• 字数: 4038字
• 语种: 中文

摘要

旨在克隆徐淮山羊脂蛋白酯酶(LPL)基因的cDNA,并通过EGFP融合蛋白实现该基因亚细胞水平的表达定位.本研究通过RT-PCR方法克隆徐淮山羊LPL基因cDNA,并初步进行生物信息学分析,构建含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的融合表达载体pEGFP-C1-LPL.聚乙烯亚胺(PEI)介导pEGFP-C1-LPL转染NIH-3T3细胞,48 h后在荧光倒置显微镜下观察,并用RT-PCR方法检测LPL mRNA在细胞内的表达.结果,成功克隆出山羊LPL基因1 530 bp长的cDNA,完整阅读框大小为1437 bp,共编码478个氨基酸,GenBank登录号为GU082383.信号肽区域预测结果表明LPL蛋白含有一小段信号肽序列,其可能性为100%.信号肽酶切割位置在第23和24个氨基酸之间,其可能性达到65.9%.成功构建融合表达载体pEGFP-C1-LPL,并且RT-PCR显示转染后LPL在mRNA水平上表达明显.EGFP-LPL融合蛋白定位在NIT-3T3细胞外和细胞膜部分.结果表明,首次成功克隆出徐淮山羊LPL基因cDNA;重组质粒pEGFP-C1-LPL构建成功,并在NIH-3T3细胞中明显表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李碧春	扬州大学动物科学与技术学院	189	1267	18.0	27.0
2	田智泉	扬州大学动物科学与技术学院	10	43	4.0	6.0
3	孙敏	扬州大学动物科学与技术学院	20	129	6.0	11.0
4	阴彦辉	扬州大学动物科学与技术学院	8	33	4.0	5.0
5	高波	扬州大学动物科学与技术学院	64	338	9.0	15.0
6	秦玉蓉	扬州大学动物科学与技术学院	12	43	4.0	5.0
7	张振韬	扬州大学动物科学与技术学院	5	12	3.0	3.0
8	许峰	扬州大学动物科学与技术学院	8	24	3.0	4.0